Только к 1937 году ученым удалось создать два равноценных по своей защитной эффективности вакцинных штамма. Сотрудники Пастеровского института во Франции создали штамм Дакар. Для этого вирус, выделенный от больного человека, был проведен 600 раз через организм белых мышей! Когда вирус успевал размножиться, брали мозг этих животных, растирали, высушивали, растворяли и заражали новую группу мышей. Так длилось несколько лет, пока вирус не потерял своих вредоносных для человека свойств (перестал поражать нервную систему и внутренние органы людей), сохранив при этом способность размножаться в организме человека и создавать у него иммунитет.
Группа вирусологов из Гарвардского университета в США, руководимая известным теперь ученым М. Тейлором, также затратила около пяти лет, чтобы приучить вирус желтой лихорадки к размножению в мозгу белых мышей. Провели многие сотни опытов. Для этого брали новорожденных мышей, заражали их в мозг, а затем тканями всей тушки этих животных инфицировали свежих новорожденных мышей. Однако мозг зараженных вирусом желтой лихорадки белых мышей содержал большое количество белковых антигенов, которые нередко вызывали побочные реакции и ряд осложнений у привитых людей. Чтобы еще больше «ослабить» вирус, ученые пропассировали его 58 раз через растущие во флаконах измельченные ткани куриного эмбриона.
Большое терпение пришлось приложить исследователям в ходе этой работы. Они сделали много промежуточных пересевов вируса через культуры тканей живых клеток различного происхождения, выращиваемых в искусственной питательной среде вне организма. Вся эта работа совершалась для того, чтобы создать живую вакцину, когда вирус остается живым и полноценным, заражает человека, но при этом не вызывает болезни. Именно в этом был весь секрет: вирус должен размножаться в организме привитого человека, но в отличие от уличного вируса желтой лихорадки не наносить вреда здоровью.
Первые опыты по прививкам экспериментальных серий вакцины ученые делали на себе, пользуясь для подстраховки одновременным введением сыворотки переболевших людей. Тем не менее в ходе этой кропотливой работы трое сотрудников исследовательской группы и сам Тейлор переболели относительно легкой формой желтой лихорадки.
В 1935 году начали иммунизацию волонтеров, а затем отдельные группы населения в Бразилии. Использовали ослабленную вакцину вместе с сывороткой переболевших людей. Естественно, что из-за отсутствия необходимых количеств сыворотки такая вакцинация не смогла приобрести достаточно широкого размаха. Работа по улучшению качества вакцины продолжалась.
Тейлор решил попробовать выращивать вирус желтой лихорадки в оплодотворенных куриных яйцах. Это решение оказалось счастливым. Вирус размножался в развивающемся курином эмбрионе, накапливался внутри такого яйца. Потребовалось 160 раз пересеять вирус из одного куриного эмбриона в другой.
Только в 1937 году к ученым пришел долгожданный успех. Им удалось получить хорошо аттенуированный, то есть полностью ослабленный, штамм вируса, сохранивший отличную способность иммунизировать людей. При вакцинации этим штаммом защитной сыворотки не требовалось. Штамм этот был назван «Асиби» — по фамилии пациента-африканца, от которого он был выделен в 1927 году. Полученную вакцину авторы назвали 17-Д.
Эта вакцина была нетоксичной для прививаемых людей. В высушенном лиофилизированном состоянии она могла сохраняться годами. Так как вакцина оказалась весьма стойкой к действию повышенной температуры, ее удавалось довольно легко транспортировать в жаркие страны и использовать для прививок всем людям, нуждавшимся в защите от желтой лихорадки.
Начались достаточно широкие испытания вакцины в Южной Америке и в Африке. Вакцина оказалась высокоэффективной: она надежно защищала европейцев, выезжавших на работу в неблагополучные по желтой лихорадке местности.
Вторая мировая война. Военные действия разворачиваются и на Африканском континенте. Англо-американские экспедиционные войска перед отправкой в тропики получают обязательную вакцинацию против желтой лихорадки. И хотя африканские джунгли кишели комарами, зараженными вирусом желтой лихорадки и способными передать этот вирус любому восприимчивому человеку, именно таких восприимчивых и не нашлось среди солдат союзнических армий, которые прибывали в Африку на борьбу с фашистскими войсками Роммеля. Солдат кусали десятки комаров, однако вакцина создавала надежный барьер и антитела уничтожали заразное начало еще до того, как вирус мог распространиться в организме и вызвать болезнь.
Между мартом и сентябрем 1942 года случилось непредвиденное. Из 2,5 миллиона солдат и офицеров, привитых против желтой лихорадки, около 80 тысяч заболели желтухой, а 62 солдата погибли. Вначале, пока среди военных медиков царила растерянность, думали о желтой лихорадке, вызванной вакцинацией. Однако врачи в госпиталях, где лечились заболевшие, ставили диагноз гепатита (болезни Боткина). Причина этих массовых осложнений была вскоре выяснена.
Экспертам-вирусологам, занимавшимся расследованием этой катастрофы, пришлось вспомнить некоторые технические детали создания вакцины. Группа Тейлора знала, что вирус желтой лихорадки довольно деликатный организм. И предохранить его от воздействия различных повреждающих факторов весьма трудно. Еще тогда исследователи провели бесчисленное количество опытов, в которых на вирус действовали повышенной температурой, различными дезинфицирующими веществами, влажностью, повышенной сухостью.
Было установлено, что качества вакцины сохраняются гарантированно, если ее лиофилизировать. Это значит, что жидкий препарат нужно было сперва заморозить до температуры минус 70 градусов Цельсия, а затем поместить в вакуумную установку, где он высыхал, минуя жидкую фазу. Чтобы вирус не погиб при лиофилизации, к нему необходимо было добавить какой-то белковый продукт. Это условие было обязательным: без защищающего белка вирус погибал. Лучшую защиту создавали белки сыворотки крови человека. Когда это было установлено, в процессе приготовления вакцины стали использовать свежую сыворотку крови человека.
Все заболевшие солдаты были привиты определенными сериями вакцины против желтой лихорадки. Возникло подозрение, что эти серии вакцины могли содержать вирус гепатита, если сыворотку крови, использованную для консервации вакцинного вируса, брали от людей, незадолго до этого болевших гепатитом. Военные эксперты изучили историю каждого донора, кровь которого использовали при приготовлении вакцины, и обнаружили, что некоторые из них действительно перенесли ранее болезнь с симптомами «катаральной желтухи». Следовательно, они болели вирусным гепатитом, с их кровью вирус гепатита попал в вакцину и вызвал своего рода эпидемию у привитых против желтой лихорадки.
С той поры сыворотка была заменена раствором белка, и вакцина 17-Д против желтой лихорадки уже никогда не причиняла вреда людям. Более того, учитывая горький опыт этих событий, разработали международные правила изготовления любых других вакцин, по которым категорически запрещается использовать в качестве стабилизаторов вирусов или в качестве растворителей сыворотки человека.
В 1948 году в Панаме началась обширная эпидемия желтой лихорадки, которая постепенно продвигалась в северном направлении, захватывая другие государства Центральной Америки: Коста-Рику, Никарагуа, Гондурас, Гватемалу и Колумбию. К 1954 году болезнь появилась даже на острове Тринидад, где ее не было около 40 лет. В этих странах погибло несколько тысяч жителей. Только поголовная вакцинация всего остального населения навсегда подавила распространение желтой лихорадки в странах Американского континента.
Этот опыт показал, что хорошая вакцина может победить болезнь, прекратить ее эпидемическое распространение, хотя в джунглях продолжают обитать зараженные обезьяны, а вокруг жилищ летают, как и прежде, комары, способные переносить вирус желтой лихорадки.