Метод 1. Вам потребуется следующее оборудование: пузырек с пробкой, новая медицинская пипетка, стакан или чашка, мензурка на 100 мл, две пустые бутылки, бумажный фильтр, стеклянная воронка, открытое пламя (газовая горелка или спиртовка) и нож. На семенах могут быть споры плесени, и, следовательно, они должны быть продезинфицированы. Для этой цели обычно применяют раствор гипохлорита кальция. Купите его в аптеке и храните плотно закупоренным в холодильнике. Для приготовления раствора положите 10 г твердого гипохлорита кальция в бутылку и добавьте 140 мл дистиллированной воды. Старательно встряхните и оставьте на час, встряхивая время от времени. Затем отфильтруйте раствор в другую бутылку. Использовать его лучше сразу, пока он свежий.
Наполните маленький пузырек на 2/3 раствором и добавьте немного семян. Количество семян, умещающееся на кончике ножа, хватает, чтобы засеять 10–12 флаконов. (Нож, естественно, должен быть стерилизован в пламени горелки и охлажден.) Плотно закупорьте пузырек. Необходимо, чтобы семена как следует намокли в растворе гипохлорита кальция, для чего встряхивайте пузырек в течение, по меньшей мере, двадцати минут, чтобы разрушить мельчайшие пузырьки воздуха, окружающие семена.
Пока вы встряхиваете семена, налейте немного оставшегося раствора гипохлорита кальция в чашку и положите туда пипетку, наполнив ее раствором до конца стеклянного баллона. Нужно также подготовить оборудование, собрав его вместе: колбы, все еще находящиеся в закрытом контейнере, чашку с капельницей, а также миску с 10 %-ным раствором хлорокса для дезинфекции вынутых во время посева пробок.
Когда семена продезинфицированы, приступайте к посеву во флаконы. В первый раз легче работать с помощником – для того чтобы держать колбы или опускать в них семена, – но при необходимости вы сможете управиться и в одиночку. Последующие операции должны выполняться быстро, чтобы колбы оставались открытыми как можно меньшее время.
Возьмите одну колбу из закрытого контейнера, выньте пробку и положите ее в миску с хлороксом. Семена могут частично подняться на поверхность в пузырьке, а частично находиться на дне, поэтому не пытайтесь собрать все одной пипеткой. Их следует быстро переместить, опустив пипетку на дно и выдавливая из нее воздух. Пузырьки будут перемешивать жидкость и семена, и вы сможете набрать несколько капель смеси для переноса в колбу. Держите пипетку в горле колбы так, чтобы капли не попадали на стенки сосуда. Нормальное количество – 4 капли на колбу; если вы будете слегка двигать капельницу по кругу, вы сможете разместить эти капли в разные места. Когда семена посеяны, возьмите пробку из миски, дайте стечь излишкам хлорокса, чтобы ничего не попало в колбу, и закупорьте ее.
Когда все колбы будут засеяны, каждую из них слегка покачайте, чтобы распределить семена по поверхности агара. Навинченные крышки или пробки должны быть обернуты, лучше всего фольгой, а затем обвязаны тесьмой. Проверьте, все ли колбы надписаны.
Одна-две колбы могут инфицироваться во время посева, и в них через несколько дней появится плесень. Надо надеяться, что это случится не со всеми сосудами. Если вы работаете очень аккуратно, можно попытаться отделаться от пятна плесени, когда оно еще маленькое. Протрите горлышко, ободок и пробку 10 %-ным хлороксом. Простерилизуйте длинный инструмент и, подготовив рабочее место, как для посева, откройте колбу, вырежьте пятно вместе с агаром и осторожно извлеките его. Не прикасайтесь к стенкам колбы, иначе плесень появится снова. Закупорьте колбу. Чем быстрее вы все это проделаете, тем меньше шансов повторного заражения. По мере приобретения вами опыта заражение будет встречаться реже.
Метод 2 состоит в применении шприца для подкожных инъекций. Взвесь с семенами набирается в стерильный шприц (необходима игла с крупным калибром отверстия). Затем игла окунается в 10 %-ный хлорокс и вставляется между ватой и стеклом в трубку, и семена выдавливаются в колбу. В случае прилипания семян к игле нужно добавить в дезинфицирующий раствор в пузырьке немного теплого 10 %-ного раствора агара. После посева пробка должна быть завернута в фольгу.
Метод 3 предполагает использование проволочной петли для посева семян, преимущества которой заключаются в том, что семена извлекаются с очень незначительным количеством дезинфицирующего раствора, и у опытного цветовода семена равномерно располагаются на агаре. Это особенно удобно для извлечения из пузырька семян, прилипших к стенкам, например, семян цимбидиума.
Один конец чистой химически инертной проволоки сворачивается в петлю около 5 мм в диаметре, а другой – прикрепляется к длинной рукоятке. Когда петля погружается во взвесь семян, а затем вынимается, покрывающая ее пленка жидкости удерживает их порядочное количество. Для всплывающих семян петля погружается лишь в верхние слои жидкости. Когда семена лягут на дно, можно слить раствор, оставив их на дне пузырька.
Петля стерилизуется в пламени и полностью охлаждается перед прикосновением к семенам. Для гарантии охлаждения можно опустить ее в другой пузырек с дезинфицирующим раствором. Чтобы посеять семена, петлю немного погружают в агар, точнее говоря, не в сам агар, а во влагу, выделяющуюся на его поверхности.Уход за колбами
Семена прорастают и лучше всего развиваются при суточной температуре 21–24 °C. В теплую погоду она может немного подниматься. Если нет возможности поддерживать постоянную температуру, можно позволить ночью опуститься ей до 18 °C. Однако отклонение более чем на 5° в любую сторону вредно для развития сеянцев; оно вызывает замедление роста. Колбы следует держать на затененной полке в оранжерее или дома в стеклянном ящике с повышенной влажностью, которая необходима для предохранения колб от высыхания в сухом комнатном воздухе. Требуемая освещенность – 2000 люкс.
В случае крайнего высыхания следует добавить в колбу немного стерильной дистиллированной воды. Эта рискованная процедура может повлечь заражение колбы, поэтому выполнять ее надо аккуратно. Крышка или пробка, горлышко и обод колбы должны быть перед открытием тщательно протерты 10 %-ным хлороксом. Затем пробка или крышка приподнимаются настолько, чтобы можно было просунуть стерилизованную пипетку, и быстро закрываются, когда вода добавлена. Если вы пользуетесь пробками с короткими прямыми трубками, как в методе 2, обработайте ватку несколькими каплями 10 %-ного раствора хлорокса и введите воду с помощью шприца. После этого закройте пробку свежей фольгой.
Во время развития сеянцев как можно меньше нарушайте покой колб: их сотрясение иногда влечет за собой падение спор плесени с горла или пробки в агар и заражение.Развитие сеянцев
Примерно через 10–14 дней после посева семена начинают разбухать. В течение 6 недель они зеленеют: развивается хлорофилл. Вскоре поверхность покрывается всасывающими волосками. Через 2–3 месяца после посева из середины сжатия намечается 1-й лист, а сам шарик увеличивается и немного сплющивается. Эта дискообразная структура называется протокормом. Вскоре развиваются 2-й и 3-й листья, стебель удлиняется и появляется первый корень. Через 6 месяцев сеянец уже хорошо развит. В последующие месяцы листья увеличиваются, могут появиться дополнительные корни. Через 9-12 месяцев после посева растения готовы к пересадке в плошки.
После шести месяцев рост сеянцев замедляется, возможно, из-за накопления продуктов метаболизма в агаре, а также из-за истощения питательной среды. В 6-месячном возрасте и даже немного раньше сеянцы пересаживают в свежие колбы, при этом они получают мощный толчок. Однако пересадка в колбы – трудное дело, и если вы не уверены в успехе, лучше этого не делать.
