На снимке 2, т. е. через 1 час 35 минут, мы видим уже сильно изменившуюся картину: шар а\ развился до стадии лининового остова и стал большего размера, чем тот же шар на снимке 1. Шар съ судя по его более крупной зернистости, повидимому, начал раньше других шаров своё развитие и успел превратиться в клетку с ядром совершенно аналогично той клетке, которую мы наблюдали на первом снимке (табл. III, рис. 1). Желточный шар в{ остался без изменений.
Из всех приведённых опытов мы приходим к определённому выводу, что клетка образуется здесь из желточных шаров, т. е. живого вещества.
В живом веществе должен обязательно быть белок, и при этом способный к обмену веществ. И действительно, нет живого организма, в котором не было бы белка и обмена веществ. Отсюда вывод, что живое вещество прежде всею— вещество, не имеющее формы клеток, т. е. неклеточное вещество, в котором есть белковые тела, и оно способно к обмену веществ и к развитию.
Желточные шары не имеют формы клеток, это — неклеточное вещество: они, на основании научных данных, состоят из белковых веществ, они в своём развитии дают, Как мы видим, новые клетки. Такое развитие может быть только при обмене веществ. Таким образом, желток и образовавшиеся из него желточные шары есть не что иное, как живое вещество.
Итак, из всего приведенного нами материала можно сделать очень определённый и окончательный вывод, что из желтка, т. е. живого вещества, выделяются желточные шары, из которых в процессе их развития образуются новые живые клетки, размножающиеся делением.
Рис. 19. Внутренний зародышевый листок клеток из желточных шаров
Какова их дальнейшая судьба? Наши наблюдения над срезами эмбриона ясно показывают картину того, как из желточных шаров на различных стадиях их развития до клетки образуются клетки зародыша. Вначале эти предклетки и клетки (рис. 19) располагаются в виде пластинки, рыхло; каждая предклетка или клетка лежит друг от друга на некотором отдалении. А затем, на более поздней стадии, они приближаются друг к другу и образуют нормальный (внутренний) зародышевый листок. Таким образом, эти клетки, образовавшиеся из желточных шаров, идут на построение эмбриона. Желток, следовательно, является не мертвым питательным веществом для эмбриона (зародыша), как это считали все последователи Вирхова, а живым веществом, участвующим в построении организма зародыша.
Изучив образование тех клеток желточных шаров, которые выпали в подэмбриональную полость из желточной массы и идут на построение внутреннего листка зародыша, мы перешли к изучению развития желточных шаров, но находящихся между двумя зародышевыми листками, т. е. в других условиях развития. Оказалось, что эти желточные шары, находясь в других условиях, развиваются иначе, что из них образуются не отдельные клетки, а целое скопление клеток, т. е. целый кровяной островок, а затем и сосуд, наполненный кровью.
В литературе по вопросу происхождения кровяных островков нет точных экспериментальных данных.
Наши экспериментальные данные, полученные на различном материале и различными методами исследования, рисуют ясную картину происхождения кровяных островков и сосудов из желточных шаров, а клеточных элементов крови — из отдельных желточных зёрен.
На таблице IV мы видим различные стадии развития желточного шара до вполне развитого и наполненного кровью сосуда. Все снимки сделаны при одном и том же увеличении и на разных стадиях развития эмбриона. На этой таблице видно, как изменяется и растёт желточный шар, проходя сначала стадию шара (табл. IV, рис. 1), а затем стадию «сингранулы» (соединение зёрен) (табл. IV, рис. 2) с вновь образовавшейся тонкой стенкой сосуда, затем стадию синтиция (соединение клеток) (табл. IV, рис. 3), затем стадию начала отхождения отдельных на поверхности лежащих клеток (табл. IV, рис. 4), затем расхождения всех клеток (табл. IV, рис. 5), но соединённых еще между собой мостиками, затем рыхлого расхождения клеток и, наконец, перед нами нормальный сосуд, наполненный кровью (табл. IV, рис. 6).
Как ни убедительна картина переходных стадий от желточного шара до кровяного островка и от кровяного островка до сосуда, наполненного кровью, тем не менее ограничиться только гистологическими препаратами на разной стадии развития эмбриона недостаточно — необходимо проверить эти результаты на культуре. В культуре из материала, полученного от эмбриона односуточной инкубации, удалось получить подтверждение образования кровяных островков из желточных шаров. Мы ставили культуру только из желточных шаров, и через сутки у нас в культуре образовались на различной стадии кровяные островки. Эти островки чечевицеобразной формы на срезах состоят из клеток на различных стадиях развития из желточных зёрен.
Вопрос о происхождении кровяных островков из желточных шаров настолько нов и важен, что у нас явилась потребность доказать верность наших наблюдений ещё более убедительными методами исследования и проследить этот процесс прижизненно в условиях нормального развития эмбриона при помощи «ультраопака» (особого микроскопа, в котором освещение препарата идёт сверху, что даёт возможность рассматривать при большом увеличении непрозрачные предметы) в условиях нормального развития эмбриона.
Таблица IV. Стадия развития желточного шара до сосуда (1–6)
Для этой цели необходимо было выработать совершенно новую методику исследования этого процесса.
Таблица V.1. Ультраопак с термостатом; 2. Яйцо, подготовленное для наблюдения
Для наблюдения за развитием эмбриона под ультраопаком необходимо было сконструировать специально пригодный для этой цели термостат[43] (табл. V, рис. 1), у которого на верхней стенке должно быть круглое отверстие для чашечки, а внутри термостата подвижный столик. На этот столик ставится чашечка с обыкновенным куриным яйцом, освобождённым до половины от скорлупы. Яйцо покрывается слюдой, приклеенной к тонкой резине, которой покрывается яйцо так, чтобы концы резины свешивались с краёв скорлупы и плотно закрывали всё яйцо (табл. V, рис. 2).
Наблюдения проводились на разных стадиях развития яйца. Очень ценные результаты были получены на яйцах восьмидневной инкубации. На схеме (табл. VI, рис. 1) виден сосуд, наполненный движущейся кровью. В этот сосуд впадают почти перпендикулярно 6 запустевших сосудов, в них нет крови, и только в одном из них имеется в движении несколько кровяных элементов.
Каждый из запустевших сосудов исходит из желточного шара в той или иной стадии развития кровяного островка. Один из желточных шаров имеет крупную зернистость, другие — более мелкую. Укрупнение зёрнышек начинается с периферии желточного шара. Чем крупней зернистость, тем крупнее сам шар.
Изучая шаг за шагом прижизненные изменения таких желточных шаров, которые прилегают к стенкам сосуда или лежат у истока запустевшего сосуда, мы наблюдаем следующие явления: на глазах наблюдателя шар с несколько более крупной зернистостью и несколько большего размера, чем обычно, начинает изменяться с периферии. Зернистость всё более укрупняется от периферии шара к центру и постепенно окрашивается в красный цвет, очевидно, вследствие накопления в нём гемоглобина[44]. Там, где желточный шар стал очень крупным и по своему цвету приближается к цвету крови, наблюдается обособленное отделение клеток с тёмным центром и блестящим гомогенным поверхностным слоем. Повидимому, мы тут имеем уже молодую клетку, проникающую в запустевший сосуд, а вслед за тем и в большой сосуд (вену) (табл. VI, рис. 1).