Если срезы агара хотят монтировать в канадском бальзаме, то их предварительно следует просветлить в терпинеоле, но этот метод не рекомендуется. Просветлять препараты в ксилоле можно только в том случае, если исследователь не боится длительного процесса обезвоживания, в течение которого препарат проводят через постепенно повышающиеся концентрации ксилола в абсолютном спирте.
В литературе описываются и другие, более сложные, методы получения хороших препаратов хищных грибов в канадском бальзаме или в венецианском терпентине; ссылки на эти работы имеются в нашем списке литературы.
ПРИЛОЖЕНИЕ 2
ДЛЯ ЛЮБИТЕЛЯ
Изучение хищных грибов представляет собой увлекательное занятие для микроскописта-любителя. Грибы легко найти и вырастить в культуре. Детали их строения настолько изящны, что вполне оправдывают энтузиазм любителя, который с наслаждением применяет в таких случаях свое умение использовать предельную разрешающую способность своего микроскопа, тогда как самый процесс охоты за нематодами он может наблюдать при малом увеличении. В распределении и экологии нематод многое еще требует изучения и легко предположить, что многие новые виды еще ожидают своего открытия. Любителя, пожелавшего заняться их изучением, не должно пугать отсутствие лаборатории, так как необходимое для этой цели оборудование, за исключением микроскопа, имеется в любом доме или же его можно наскоро устроить.
Питательную агаровую среду можно приготовить в кухне, используя для нее медицинские склянки. Кукурузную муку можно получить у любого продавца кукурузы или можно заменить ее сухим горохом, который кипятят в водопроводной воде и полученную жидкость сливают после того, как все частицы осядут. Отвар готовят из расчета одной горсти гороха на 0,56 л воды. Наиболее легкий способ приготовления горохового агара заключается в том, что 7,1 г агара растворяют при кипячении в 280 куб. см воды и добавляют к нему 0,56 л горохового экстракта. Полученную среду можно разлить в медицинские склянки, закрыв их горлышки ватой вместо корковых пробок.
Если агар достать трудно, то вместо него можно использовать желатин из расчета 85 г на каждые 0,56 л готовой среды. Один из моих друзей, страстный любитель, не имея возможности во время войны достать ни агара, ни желатина, сам приготовлял прекрасную среду путем кипячения в воде «ягод» тисса.
Медицинские склянки и их содержимое должны быть затем простерилизованы. Этот процесс можно легко осуществить в сосуде для варки на пару под давлением, если таковой имеется; давление в 6,8 кг в течение 20 мин. бывает вполне достаточным. Если такого сосуда нет, то стерилизацию можно с одинаковым успехом провести в обычном домашнем котле для варки на пару, газовом медном котле или даже в глубокой кастрюле с крышкой; разница заключается лишь в том, что в этих случаях применяется «прерывистый» способ: материал стерилизуется по 30 мин. в день в течение 3 последовательных дней, а между обработками охлаждается[37].
При отсутствии чашек Петри их можно заменить маленькими мелкими чашками из стекла пирекс с крышками. До использования их следует простерилизовать путем нагревания в течение 30 мин. в печи при 165°. Если стерилизацию проводят в обычных кухонных условиях, то любитель должен попросить свою жену подготовить ему «довольно холодную духовку».
При разливании стерильной питательной среды в стерильные чашки — независимо от того, будут ли это настоящие чашки Петри или какие-либо импровизированные сосуды — необходимо соблюдать меры предосторожности против ее загрязнения. Среду расплавляют или в котле для варки на пару, или путем погружения сосуда со средой в кипящую воду и, когда агар расплавится, тонким слоем наливают его в каждую чашку. При вынимании ватной пробки горлышко колбы или бутылки нужно 2—3 раза провести сквозь пламя, чтобы убить все споры и бактерии на его краях, а крышку чашки следует приподнять не больше, чем требуется для наливания в чашку среды. Во время разливания среды крышку чашки держат над нижней ее частью, чтобы предупредить попадание частиц пыли из воздуха на стерильную внутреннюю часть чашки. После окончания разливки чашки оставляют в покое на 30 мин. или дольше, чтобы среда застыла, после чего они готовы к употреблению. Методика инокулирования чашек гниющим растительным материалом и т. п. была уже описана. Совершать длинные экскурсии в поисках подходящего материала нет никакой надобности, по крайней мере в первое время, потому что в кучах компоста, имеющихся в собственном саду любителя, вероятно, можно найти несколько различных видов. Методика исследования культур после начала их роста описана в приложении 1.
Эти простые методы вполне обеспечат успех работы, я сам применял их[38].
ЛИТЕРАТУРА
Я не пытаюсь привести здесь исчерпывающий список литературы по хищным грибам, а хочу лишь указать читателю некоторые работы, дающие общие представления о хищных грибах или об их использовании для борьбы с нематодами. Для определения различных видов можно пользоваться работами Дречслера, помещенными в журналах: Mycologia, Phytopathology, The Journal of the Washington Academy of Science и The Bulletin of the Torrey Botanical Club. Английские работы по хищным грибам опубликованы в журнале The Transactions of the British Mycotogical Society. Очень ценным пособием для лиц, изучающих эту проблему, является сводка Доллфуса; она содержит обзор всей работы, проделанной по хищным грибам, истребляющим нематод, вплоть до конца 1945 г., и богато иллюстрирована.
Общие работы по хищным грибам
Dоllfus R. P., Parasites (animaux et vegetaux) des Helminths. Lechevalier, Paris, 1946.
Drechsler C., Predacious fungi, Biol. Rev. 16, 265—290, 1941.
Duddingtоn C. L., Predacious fungi, J. Quekett. micr. CL, Ser. IV, 3, 67— 88, 1950.
Duddington C. L., Fungi that attack microscopic animals, Bot. Rev., 21, 377—439, 1955.
Работы по физиологии и экологии хищных грибов
Comandon J., Fonbrune P., de, Recherches experimentales sur les champignons predateurs de nematodes du sol, C. R. Soc. Biol., Paris, 129, 619— 625, 1938.
Couch J. N., The formation and operation of the traps in the nematode-catching fungus Dactylella bembicodes Drechsler, J. Elisha Mitchell Sci. Soc., 53, 301—309, 1937.
Deschiens R., Lamy L., Sur les facteurs determinant l’apparition des pieges chez les Hyphomycetes predateurs de nematodes, C. R. Acad. Sci., Paris, 215, 450—452, 1942.
Deschiens R., Lamy L., Comportement des Hyphomycetes predateurs en aerobiose et anaerobiose, C. R. Soc. Biol., Paris, 136, 736—738, 1942.
Duddington C. L., The ecology of predacious fungi. I. Preliminary survey, Trans. Brit, mycol. Soc., 34, 233—331, 1951.
Duddingtоn C. L., Predacious fungi in agricultural soils, Nature, Lond., 173, 500, 1954.
Lamy L., Intensite et vitesse relatives de la formation des dispositifs capteurs chez les Hyphomycetes predateurs des nematodes. C. R. Soc. Biol., Paris, 137, 337—339, 1943.
Roubaud E., Deschiens R., Sur les agents de formation des dispositifs de capture chez les Hyphomycetes predateurs de nematodes, C. R. Acad. Sci., Paris, 209, 77—79, 1989.
Работы по биологическому методу борьбы с нематодами
Descazeaux J., Sterilisation biologique des crottins parasites par des larves de nematodes, Bull. Acad. Vet. Fr., 12, 136—139, 1939.
37
Оставляется при комнатной температуре.— Прим. ред.
38
Начинающие любители и студенты найдут дополнительные многочисленные и полезные методические указания в книгах: Н. А. Наумов, Методы микологических и фитопатологических исследований, Л., 1937; Т. Л. Доброзранова, Руководство к практическим занятиям по фитопатологии, М.—Л., 1949; В. Л. Омелянский, Практическое руководство по микробиологии, М.—Л., 1940; Г. И. Роскин, Микроскопическая техника, М., 1946. Особенно много ценных сведений и указаний непосредственно по хищным гельминтофагам содержится в книге Ф. Ф. Сопрунова, Хищные грибы — гифомицеты и их применение в борьбе с патогенными нематодами, Изд. АН Туркменской ССР, 1—366, Ашхабад, 1958. — Прим. ред.