После выявления способности указанных 3 видов грибов расправляться с корневыми галловыми нематодами были поставлены опыты для выяснения эффективности их деятельности в почве. Данные опыты представляли особенно большой интерес, так как являлись первой попыткой проведения непосредственных наблюдений над поведением хищных грибов в почве. Значение их не требует пояснений.
Квадратики агара, вырезанные из культуры Dactylella bembicodes, закапывали на глубину 5 см в почву, сильно зараженную корневой галловой нематодой; предварительно их помещали в шелковую сетку, соединенную с шелковой нитью, привязанной к колышку на поверхности почвы: таким образом, квадратики агара легко можно было извлечь из почвы через требуемый промежуток времени. Через 15 дней эти сетки осторожно вынимали из почвы и исследовали квадратики агара под микроскопом. Грибы образовали много сжимающих колец, в которые попалось большое число нематод. При подсчете жертв оказалось, что на 6,5 кв. см поверхности агара приходилось около 30 пойманных нематод.
Наблюдения были продолжены для того, чтобы выяснить, если возможно, насколько хищные грибы могут далеко распространиться в почве из какой-либо определенной точки; эти данные будут иметь весьма важное значение в случае практического применения инокуляции почвы хищными грибами, так как радиус действия гриба будет определять потребные количества инокулума на единицу площади. Очень мелкие, длиной 2,5 мм, куски соломин, несущие споры Dactylella bembicodes, были смешаны с почвой, зараженной корневой галловой нематодой, и оставлены в ней на 15 дней; за это время споры гриба проросли и тонкие гифы начали распространяться в стороны от мицелия, вытягиваясь во всех направлениях, как нити паутины. Через 15 дней почву, окружающую «островки» соломы, тщательно исследовали и обнаружили, что гифы гриба хорошо развились на протяжении 1,87 см от «островка» соломы.
На основании этих данных можно вычислить, сколько понадобится соломы, зараженной спорами, для такой инокуляции почвы, при которой грибы образуют сплошную паутину мицелия, преграждающую нематодам путь всюду, где бы они ни находились. Если придавать этому опыту какую-либо легальность, то следует добиваться, чтобы кусочки соломы после тщательного смешивания с верхним слоем почвы на участке располагались в среднем не дальше, чем на расстоянии 2,5 см друг от друга, так, чтобы нити мицелия, отходящие от каждого куска соломины, смыкались бы с соседними. Опыты показали, что такое расположение можно обеспечить путем смешивания 100 г соломы с 60 кг почвы. В практических условиях потребуется вносить около 5 т соломы на 1 га.
Но аргументацию необходимости внесения числа тонн соломы ка гектар на основании данных, полученных при смешивании какого-то количества граммов соломы с килограммами почвы, следует считать недостаточно обоснованной при такой работе, где приходится учитывать много переменных факторов; поэтому приведенные выше цифры не следует пока принимать всерьез, даже если бы практически удалось обеспечить в полевых условиях требуемое равномерное перемешивание поверхностного слоя почвы. Кроме того, и самый опыт не лишен недостатков. По данным экспериментатора, гриб переставал распространяться в почве, как только отдалялся на определенное расстояние от исходной точки, в данном случае от куска соломины. Но следует помнить, что в условиях опыта гриб имел возможность расти только в течение 15 дней; между тем многие хищные грибы с сжимающимися кольцами типа Dactylella bembicodes растут медленно, и поэтому трудно рассчитывать, что за такой короткий срок, как 15 дней, они могут достигнуть максимального роста. Быстрорастущие грибы, например Arthrobotrys oligospora, могут, вероятно, дать совершенно иные результаты.
Другая проблема, которую изучали французские исследователи, касалась влияния хищных грибов на растительность и домашних животных, потому что как бы эффективно они ни уничтожали нематод, но если бы при этом они повреждали и культуры, которые должны защищать, то польза их была бы сведена к нулю. Для выяснения этого вопроса на пастбище было выделено два одинаковых огороженных участка площадью 8,4 кв. м. Один из них искусственно заразили спорами Arthrobotrys oligospora, Dactylella ellipsospora и D. bembicodes из расчета примерно 4000 спор на 0,8 <em>кв. м</em>. Затем на каждый участок было выпущено по 2 овцы. Исследование проб почвы показало, что все 3 вида гриба прочно обосновались на опытном участке. У овец никаких болезненных явлений не наблюдалось, а проведенное в конце года обследование растительности обоих участков показало, что между ними никакой разницы нет. По-видимому, грибы не наносили вреда ни растениям, ни животным.
В другом опыте в корм одной пары кроликов в течение 2 месяцев добавляли культуры хищных грибов. До самого конца этого периода у животных никаких болезненных явлений не отмечалось и при сравнении их с другой парой кроликов, не получавших грибов в корме, никакой разницы обнаружено не было. Примерно за 2 года до этих опытов производили скармливание хищных грибов домашним животным по совершенно иным соображениям. Так как некоторые паразитические нематоды обитают в кишечнике животных, то считалось, что наилучшим способом борьбы с ними является включение хищных грибов в корм животных; кроме того что грибы непосредственно соприкасались в этом случае с нематодами в наиболее удобном для них месте, предполагалось также, что выходящие с экскрементами споры или мицелий гриба будут способствовать очищению зараженных пастбищ от нематод. Культуры Arthrobotrys oligospora и Dactylella bembicodes, приготовленные на отрубях, в течение 2 дней скармливались в больших количествах 2 лошадям и 2 морским свинкам. Почему были выбраны морские свинки для этой цели, я не знаю, может быть по той вполне понятной причине, что гибель морской свинки обходится дешевле, чем гибель лошади.
Этот опыт, к сожалению, не дал желаемых результатов. Животные, правда, не пострадали, но грибы не выживали, так как при регулярном исследовании экскрементов животных в течение 9 дней не удалось обнаружить даже следов их. По-видимому, хищные грибы погибали при прохождении через кишечник животных, вероятно под воздействием пищеварительных соков. Об этом можно только пожалеть, потому что идея была очень заманчива.
Часть усилий французских исследователей была направлена на производство культур хищных грибов в больших масштабах, причем для этой цели были разработаны некоторые остроумные методы, преимущественно в области получения больших количеств спор хищных грибов. Вначале это казалось очень трудной задачей. Обычный питательный агар хотя и обеспечивал интенсивное развитие мицелия гриба, но не мог способствовать достаточно обильному спороношению его. Это затруднение в конце концов было преодолено путем добавления к агару измельченной соломы, которая, по-видимому, стимулировала спорообразование у грибов; при этом споры в основном образовывались на соломе, и такую солому, сплошь покрытую спорами, можно было затем выбирать из колб с культурами грибов и использовать для инокуляции почвы.
При другом способе, без использования соломы, грибы выращивались в больших сосудах на агаровой питательной среде до момента максимального спорообразования. Для извлечения спор в колбы насыпали соответствующее количество сухого инертного порошка, например стерилизованной и распыленной почвы, осторожно встряхивали их и затем высыпали споры вместе с порошком; полученную смесь подсушивали и хранили до тех пор, пока в ней не появлялась необходимость. Установлено, что высушенные споры сохраняли жизнеспособность в течение года.
Была проведены также опыты массового производства гриба на жидких питательных средах. В качестве среды в этих опытах использовали отвар, приготовленный путем кипячения зерен кукурузы в воде; полученную жидкость фильтровали и добавляли к ней солодовый экстракт. Готовый отвар разливали в пробирки и стерилизовали; затем пробирки инокулировали культурой того гриба, который нужно было вырастить, и оставляли культуры развиваться. Примерно через 2 недели на поверхности жидкости в пробирке появлялся диск мицелия и гриб начинал образовывать споры; спорообразование достигало максимума примерно через 30 дней после инокуляции пробирок. В это время диски мицелия вместе со спорами извлекали из пробирок, высушивали и смешивали с высушенным листовым перегноем. Подсчеты показали, что каждый диск мицелия содержал в среднем 117420 спор, так что при разбавлении соответствующим наполнителем сравнительно небольшое число таких дисков может хватить на долгое время.